性病淋巴肉芽肿诊断的确定主要根据接触史（有不洁性交史）、临床表现（在生殖器部位出现过表浅糜烂与溃疡。1～4周后出现两侧腹股沟淋巴结炎，有槽沟征及喷水壶状多数瘘管，痊愈后留疤痕。）和实验室检查。
　　
　　诊断性病淋巴肉芽肿，实验室检查是必需的。首先要作血清学检查，它对诊断和判定疗效都是必要的。有条件的要作衣原体的培养，进一步确定衣原体的血清型。此外，Frei皮肤试验、组织病理检查可根据具体情况进行。
　　
　　诊断性病淋巴肉芽肿需作的血清学检查为：
　　
　　1、对流免疫电泳法
　　
　　此为检查衣原体抗体的一种简便、快速和特异的试验。约有90%的患者能被本试验证实。
　　
　　2、补体结合试验
　　
　　所用的抗原是由瑞士的微生物研究所生产的群抗原，是本病重要的血清学诊断方法，能检测两种抗体：砂眼衣原体抗体和鹦鹉热衣原体抗体。因为人群中常见有衣原体感染，所以本试验阳性有助于诊断，但不能靠其结果决定诊断。患者血清滴度高，多为1：64或以上，而结膜炎砂眼衣原体感染时血清滴度低（1：16—1：32）。一般而言，本试验血清滴度1：8或1：6对本病诊断有提示意义，而1：64或以上则有诊断意义。恢复期患者血清滴度降低。此外，血清试验的结果不完全与抗生素治疗反应相平行。

　　
　　3、微量免疫荧光试验
　　
　　此试验有一定的敏感性和特异性，比补体结合试验更为敏感和特异，能检测不同血清型衣原体特异性抗体，可用来鉴别本病和其他衣原体感染。通常滴度大于512才有意义。但因试验条件的限制，目前尚难以广泛应用。
　　
　　4、活体组织检查
　　
　　取皮肤、黏膜损害或淋巴结制成切片，观察其病理变化，对诊断有提示意义。
　　
　　5、病原体培养
　　
　　宜取肿大的淋巴结穿刺物接种在鸡胚卵黄囊，或做组织（细胞）培养或小白鼠颅内接种。阳性者有诊断价值。另需做细菌培养和涂片革兰氏染色，以除外葡萄球菌或其他细菌所致的淋巴结炎症。
　　
　　培养性病性淋巴肉芽肿的标本在男性常取自尿道、直肠或肿大的淋巴结。在女性主要取自直肠和宫颈。接种前应用生长培养基作1∶1稀释，以避免对细胞的毒性。标本在接种前应先作抗生素处理。常用的抗生素有庆大霉素、万古霉素、链霉素和制霉菌素。由于性病淋巴肉芽肿衣原体不必离心就能感染邻近的细胞，导致细胞裂解，这种性状有助于鉴定可疑分离物。

　　
　　6、其他
　　
　　可有高r球蛋白血症，白蛋白/球蛋白比例倒置，lgA、lgG增高，轻度贫血，白细胞增多，血沉加快，梅毒血清试验假阳性，冷沉球蛋白和类风湿因子阳性等。